本发明公开了一种藏药组合物棘豆消痒制剂的质量检测方法。本发明对现有的藏药组合物棘豆消痒制剂质量标准进行了相应提高,改进了原标准中轮叶棘豆和儿茶的鉴别方法,增加了安息香的鉴别方法;增加了制剂中重金属、蓖麻碱的含量检查方法,硫、总黄酮、熊去氧胆酸、麝香酮的含量测定方法,使得藏药组合物棘豆消痒制剂的质量检测更加准确,进一步确保了该制剂的安全有效、质量可控。
1.一种原料药组成为轮叶棘豆150重量份、熊胆粉2重量份、麝香1重量份、儿茶50重量份、岩精膏50重量份、胆矾30重量份、制硫磺30重量份、蓖麻子50重量份、川西千里光10重量份、安息香10重量份的藏药组合物棘豆消痒制剂的检测方法,该方法包括如下鉴别和/或含量测定方法中的一种或几种:鉴别:A.轮叶棘豆的鉴别取藏药组合物棘豆消痒液体制剂,相当于原药材5-10g,滤过,滤液用二氯甲烷振摇提取2次,每次加二氯甲烷20-40ml,合并二氯甲烷液,挥干,残渣加甲醇2-5ml使溶解,作为供试品溶液;或藏药组合物棘豆消痒固体制剂,相当于原药材5-10g,研细,加水20-40ml,超声20-40分钟,滤过,滤液用二氯甲烷振摇提取2次,每次加二氯甲烷20-40ml,合并二氯甲烷液,挥干,残渣加甲醇2-5ml使溶解,作为供试品溶液;取轮叶棘豆对照药材1-3g,加水20-40ml,煎煮1h,滤过,滤液用二氯甲烷振摇提取2次,每次加二氯甲烷20-40ml,合并二氯甲烷液,挥干,残渣加甲醇2-5ml使溶解,作为对照药材溶液;照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VIB的薄层色谱法进行试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积份数比为5-9:5的环己烷-乙酸乙酯为展开剂,展开,取出,晾干;喷以体积份数比10%硫酸乙醇溶液,105°C加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;B.儿茶的鉴别取藏药组合物棘豆消痒液体制剂,相当于原药材5-10g,滤过,滤液用二氯甲烷振摇提取2次,每次加二氯甲烷20-40ml,合并二氯甲烷液,挥干,残渣加甲醇2-5ml使溶解,作为供试品溶液;或取藏药组合物棘豆消痒固体制剂,相当于原药材5-10g,研细,加水20-40ml,超声20-40分钟,滤过,滤液用二氯甲烷振摇提取2次,每次加二氯甲烷20-40ml,合并二氯甲烷液,挥干,残渣加甲醇2-5ml使溶解,作为供试品溶液;取儿茶对照药材0.5-2g,加水20-40ml,煎煮1h,滤过,滤液用二氯甲烷振摇提取2次,每次加二氯甲烷20-40ml,合并二氯甲烷液,挥干,残渣加甲醇2-5ml使溶解,作为对照药材溶液;照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VIB的薄层色谱法进行试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积份数比为4:2-7:0.4的环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂,展开,取出,晾干;喷以体积份数比10%硫酸乙醇溶液,105°C加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;含量测定:C.熊去氧胆酸的含量测定照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VID高效液相色谱法进行测定;色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以体积份数比75-80:20-25甲醇-体积份数比1%冰醋酸水溶液为流动相;蒸发光散射检测器检测;理论板数按熊去氧胆酸峰计算应不低于2000;对照品溶液的制备:取熊去氧胆酸对照品适量,精密称定,加乙醇制成每lml含0.3mg的溶液,即得;供试品溶液的制备:精密量取藏药组合物棘豆消痒液体制剂0.5-1.5ml或精密称取藏药组合物棘豆消痒固体制剂0.5-1.5g,置具塞的锥形瓶中,精密加入乙醇50ml,密塞,称定重量,超声处理30分钟,放冷,再称定重量,用乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液25ml,浓缩至干,残渣加体积份数比1%冰醋酸水溶液10ml使溶解,用乙酸乙酯萃取5次,每次10ml,合并乙酸乙酯液,40°C以下减压蒸干,残渣加乙醇溶解并定容至2ml量瓶中,摇匀,滤过,取续滤液,即得;测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
2.如权利要求1所述的棘豆消痒制剂的检测方法,其中的制剂是指取上述权利要求1的原料药,按常规工艺,加入常规辅料制备成临床可接受的任何一种剂型。
3.如权利要求1或2所述的棘豆消痒制剂的检测方法,其特征在于,该方法包括如下鉴别和/或含量测定方法中的一种或几种:鉴别:A.轮叶棘豆的鉴别取本发明藏药组合物棘豆消痒洗剂,相当于原药材7.5g,滤过,滤液用二氯甲烷振摇提取2次,每次加二氯甲烷20ml,合并二氯甲烷液,挥干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液;取轮叶棘豆对照药材2g,加水20ml,煎煮1h,滤过,滤液用二氯甲烷振摇提取2次,每次加二氯甲烷20ml,合并二氯甲烷液,挥干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为对照药材溶液;照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VIB薄层色谱法进行试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积份数比为7:5的环己烷-乙酸乙酯为展开剂,展开,取出,晾干;喷以体积份数比10%硫酸乙醇溶液,105°C加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;B.儿茶的鉴别取本发明藏药组合物棘豆消痒洗剂,相当于原药材7.5g,滤过,滤液用二氯甲烷振摇提取2次,每次加二氯甲烷20ml,合并二氯甲烷液,挥干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液;取儿茶对照药材1g,加水20ml,煎煮1h,滤过,滤液用二氯甲烷振摇提取2次,每次加二氯甲烷20ml,合并二氯甲烷液,挥干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为对照药材溶液;照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VIB薄层色谱法进行试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积份数比为4:5:0.4的环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂,展开,取出,晾干;喷以体积份数比10%硫酸乙醇溶液,105°C加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;含量测定:C.熊去氧胆酸的含量测定照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VID高效液相色谱法进行测定;色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以体积份数比80:20甲醇-体积份数比1%冰醋酸水溶液为流动相;蒸发光散射检测器检测;理论板数按熊去氧胆酸峰计算应不低于2000;对照品溶液的制备:取熊去氧胆酸对照品适量,精密称定,加乙醇制成每lml含0.3mg的溶液,即得;供试品溶液的制备:精密量取藏药组合物棘豆消痒洗剂1.0ml,置具塞的锥形瓶中,精密加入乙醇50ml,密塞,称定重量,超声处理30分钟,放冷,再称定重量,用乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液25ml,浓缩至干,残渣加体积份数比1%冰醋酸水溶液10ml使溶解,用乙酸乙酯萃取5次,每次10ml,合并乙酸乙酯液,40°C以下减压蒸干,残渣加乙醇溶解并定容至2ml量瓶中,摇匀,滤过,取续滤液,即得;测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
4.如权利要求1或2所述的棘豆消痒制剂的检测方法,其特征在于,该方法包括如下鉴别和/或含量测定方法中的一种或几种:鉴别:A.轮叶棘豆的鉴别取本发明藏药组合物棘豆消痒软膏,相当于原药材7.5g,加水30ml,超声30分钟,滤过,滤液用二氯甲烷振摇提取2次,每次加二氯甲烷20ml,合并二氯甲烷液,挥干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液;取轮叶棘豆对照药材2g,加水20ml,煎煮1h,滤过,滤液用二氯甲烷振摇提取2次,每次加二氯甲烷20ml,合并二氯甲烷液,挥干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为对照药材溶液;照《中国药典》2010年版一部附录VIB薄层色谱法进行试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积份数比为7:5的环己烷-乙酸乙酯为展开剂,展开,取出,晾干;喷以体积份数比10%硫酸乙醇溶液,105°C加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;B.儿茶的鉴别取本发明藏药组合物棘豆消痒软膏,相当于原药材7.5g,加水30ml,超声30分钟,滤过,滤液用二氯甲烷振摇提取2次,每次加二氯甲烷20ml,合并二氯甲烷液,挥干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液;取儿茶对照药材1g,加水20ml,煎煮1h,滤过,滤液用二氯甲烷振摇提取2次,每次加二氯甲烷20ml,合并二氯甲烷液,挥干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为对照药材溶液;照《中国药典》2010年版一部附录VIB薄层色谱法进行试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积份数比为4:5:0.4的环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂,展开,取出,晾干;喷以体积份数比10%硫酸乙醇溶液,105°C加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;含量测定:C.熊去氧胆酸的含量测定照《中国药典》2010年版一部附录VID高效液相色谱法进行测定;色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以体积份数比80:20甲醇-体积份数比1%冰醋酸水溶液为流动相;蒸发光散射检测器检测;理论板数按熊去氧胆酸峰计算应不低于2000;对照品溶液的制备:取熊去氧胆酸对照品适量,精密称定,加乙醇制成每lml含0.3mg的溶液,即得;供试品溶液的制备:精密量取藏药组合物棘豆消痒软膏1.0g,置具塞的锥形瓶中,精密加入乙醇50ml,密塞,称定重量,超声处理30分钟,放冷,再称定重量,用乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液25ml,浓缩至干,残渣加体积份数比1%冰醋酸水溶液10ml使溶解,用乙酸乙酯萃取5次,每次10ml,合并乙酸乙酯液,40°C以下减压蒸干,残渣加乙醇溶解并定容至2ml量瓶中,摇匀,滤过,取续滤液,即得;测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。技术领域
本发明涉及一种藏药组合物制剂的质量检测方法,特别涉及一种藏药组合物棘豆消痒制剂的质量检测方法。
背景技术
棘豆消痒洗剂源于藏医学家贡珠·云丹嘉措(公元1813-1899年)的《藏医临床札记》。书中记载:硫黄、轮叶棘豆、熊胆粉、岩精膏、儿茶、麝香、胆矾、研磨以黄牛尿调和,涂于皮肤,治疗皮肤病、疱疹,特别对梅毒引起的刺痛、瘙痒等有良效,此方古名“肉巴德西”。历代藏医数百年的临床应用证明:棘豆消痒洗剂对急慢性皮炎、毒疮及梅毒引起的皮肤局部刺痛和瘙痒有良好疗效。金诃藏药的研发人员以藏医药的六味、八性、十七效等配伍理论为指导,在“肉巴德西”的基础上,添加了具有散瘀止痛、敛黄水功效的安息香和川西千里光,研发出了藏药独家品种——棘豆消痒洗剂。长期临床试验及应用发现,棘豆消痒洗剂的疗效优于原方,特别是在治疗急慢性皮炎,梅毒、淋病等性病引起的皮肤局部瘙痒、刺痛及皮肤损害等方面,具有显著疗效。棘豆消痒洗剂为青海金诃藏药药业股份有限公司独家品种,收载于国家药品标准,标准编号:WS-11342(ZD-1342)-2002-2012Z。藏医:局限在性病局部刺激症状、瘙痒及皮肤瘙痒症;中医:清热解毒,护肤止痒,用于皮肤瘙痒症。棘豆消痒洗剂原质量标准包含儿茶、轮叶棘豆薄层鉴别,儿茶中儿茶素含量测定项,但鉴别方法无法有效鉴别制剂中的轮叶棘豆,儿茶的鉴别结果Rf值偏高,也会影响儿茶的鉴别结果,因此,对标准中的鉴别方法进行改进,并增加制剂中安息香的鉴别方法。原质量标准也未对处方中含有的贵重药材(熊胆粉、麝香)、蓖麻子中毒性成分蓖麻碱、矿物药材(岩精膏、胆矾、制硫磺)等进行质量研究,不能有效控制该制剂的质量,造成棘豆消痒洗剂的质量检测不够准确可靠,制剂存在安全隐患,质量标准有待提高。目前,现有技术中也未发现对棘豆消痒洗剂的其他质量检测方法方面的报道。
发明内容
针对现有技术的不足,本发明的目的是提供一种藏药组合物棘豆消痒制剂的质量检测方法。发明概述本发明对现有的藏药组合物棘豆消痒洗剂质量标准进行了相应提高,包括改进了原标准中轮叶棘豆和儿茶的鉴别方法,增加了安息香的鉴别方法;在原标准的基础上增加了制剂中重金属、蓖麻碱、硫、总黄酮、熊去氧胆酸以及麝香酮的含量测定方法,进一步确保了该制剂的安全有效、质量可控。术语说明:棘豆消痒洗剂是《国家中成药标准汇编·眼科耳鼻喉科皮肤科分册》记载的药品名称。棘豆消痒制剂包括棘豆消痒洗剂及用棘豆消痒洗剂原料药配方配制的其他制剂。Rf值:薄层色谱法中原点到斑点中心的距离,与原点到溶剂前沿的距离的比值。本发明的技术方案如下:一种原料药组成为轮叶棘豆150重量份、熊胆粉2重量份、麝香1重量份、儿茶50重量份、岩精膏50重量份、胆矾30重量份、硫磺(制)30重量份、蓖麻子50重量份、川西千里光10重量份、安息香10重量份的藏药组合物棘豆消痒制剂的质量检测方法,该方法包括如下鉴别和/或含量测定方法中的一种或几种:鉴别:A.轮叶棘豆的鉴别取藏药组合物棘豆消痒液体制剂,相当于原药材5-10g,滤过,滤液用二氯甲烷振摇提取2次,每次加二氯甲烷20-40ml,合并二氯甲烷液,挥干,残渣加甲醇2-5ml使溶解,作为供试品溶液;或藏药组合物棘豆消痒固体制剂,相当于原药材5-10g,研细,加水20-40ml,超声20-40分钟,滤过,滤液用二氯甲烷振摇提取2次,每次加二氯甲烷20-40ml,合并二氯甲烷液,挥干,残渣加甲醇2-5ml使溶解,作为供试品溶液;取轮叶棘豆对照药材1-3g,加水20-40ml,煎煮1h,滤过,滤液用二氯甲烷振摇提取2次,每次加二氯甲烷20-40ml,合并二氯甲烷液,挥干,残渣加甲醇2-5ml使溶解,作为对照药材溶液;照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VIB的薄层色谱法进行试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积份数比为5-9:5的环己烷-乙酸乙酯为展开剂,展开,取出,晾干;喷以体积份数比10%硫酸乙醇溶液,105°C加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;B.儿茶的鉴别取藏药组合物棘豆消痒液体制剂,相当于原药材5-10g,滤过,滤液用二氯甲烷振摇提取2次,每次加二氯甲烷20-40ml,合并二氯甲烷液,挥干,残渣加甲醇2-5ml使溶解,作为供试品溶液;或取藏药组合物棘豆消痒固体制剂,相当于原药材5-10g,研细,加水20-40ml,超声20-40分钟,滤过,滤液用二氯甲烷振摇提取2次,每次加二氯甲烷20-40ml,合并二氯甲烷液,挥干,残渣加甲醇2-5ml使溶解,作为供试品溶液;取儿茶对照药材0.5-2g,加水20-40ml,煎煮1h,滤过,滤液用二氯甲烷振摇提取2次,每次加二氯甲烷20-40ml,合并二氯甲烷液,挥干,残渣加甲醇2-5ml使溶解,作为对照药材溶液;照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VIB的薄层色谱法进行试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积份数比为4:2-7:0.4的环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂,展开,取出,晾干;喷以体积份数比10%硫酸乙醇溶液,105°C加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;C.安息香的鉴别取藏药组合物棘豆消痒液体制剂,相当于原药材5-10g,水浴蒸干,残渣加甲醇20-40ml,超声20-40分钟,滤过,滤液水浴蒸干,残渣加甲醇1-3ml使溶解,作为供试品溶液;或取藏药组合物棘豆消痒固体制剂,相当于原药材5-10g,研细,加甲醇20-40ml,超声20-40分钟,滤过,滤液水浴蒸干,残渣加甲醇1-3ml使溶解,作为供试品溶液;取安息香对照药材0.1-0.3g,加甲醇5-10ml,超声20-40分钟,滤过,滤液水浴蒸干,残渣加甲醇1-3ml使溶解,作为对照药材溶液;照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VIB的薄层色谱法进行试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积份数比为4-8:4:3:0.5的沸程为60-90°C的石油醚-正己烷-乙酸乙酯-冰醋酸为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯365nm下检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的荧光斑点;含量测定:A.重金属的含量限度测定对照品溶液的制备:精密称取30mg硝酸铅,置250ml量瓶中,加体积份数比9.5%-10.5%稀硝酸2ml溶解后,加蒸馏水至刻度,摇匀,作为标准对照品溶液;标准曲线的制备:精密量取上述对照品溶液0.0、0.1、0.5、1.0、5.0、10.0ml,分别置100ml量瓶中,编号为1至6号,加去离子水至10.0ml,备用;取空坩埚6只,在550°C灰化3小时,放冷,加体积份数比36~38%浓盐酸2ml,置水浴上蒸干后加水15ml,水浴加热2分钟,冷却后加酚酞指示剂1滴,用氨试液调至微红色,加稀醋酸2ml,分别转移至已备好的1至6号100ml量瓶中,加10μl硫化钠溶液,再加pH3.2的水溶液稀释至刻度,摇匀,静置5分钟,以1号为空白;照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VA紫外-可见分光光度法进行试验,在208nm波长处依次测定吸光度;以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线;测定法:精密量取藏药组合物棘豆消痒液体制剂1.0-3.0ml或精密称取藏药组合物棘豆消痒固体制剂1-3g,置坩埚内,缓缓炽灼至完全炭化,放冷,加体积份数比96~98%浓硫酸1.0ml,使恰湿润,用40-60°C低温加热至硫酸除尽后,再加体积份数比65~68%浓硝酸1.0ml蒸干,至氧化氮蒸气除尽后,放冷,照标准曲线的制备项下的方法,自“在550°C灰化3小时”起,依法测定吸光度,从标准曲线上读出供试品溶液中重金属的含量(μg/ml),计算,即得;B.蓖麻碱的含量测定照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VID高效液相色谱法进行测定;色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以体积份数比13-15:87-85乙腈-水为流动相;检测波长为308nm;理论板数按蓖麻碱峰计算应不低于2000;对照品溶液的制备:取蓖麻碱对照品适量,精密称定,加乙醇制成每lml含20μg的溶液,即得;供试品溶液的制备:精密量取藏药组合物棘豆消痒液体制剂1.0-3.0ml或精密称取藏药组合物棘豆消痒固体制剂1-3g,置具塞的锥形瓶中,精密加入乙醇50ml,密塞,称定重量,超声处理30分钟,放冷,再称定重量,用乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液25ml,浓缩至干,残渣加水10ml加热使溶解,用氯仿萃取5次,每次10ml,合并氯仿液,蒸干,残渣加乙醇溶解并定容至2ml容量瓶中,摇匀,滤过,取续滤液,即得;测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得;C.硫的含量测定对照品溶液的制备:精密称取0.15g无水Na₂S0₄,用水溶解后,转入100ml量瓶中,用水定容,得S0₄^2-的贮备液;临用时,精密量取贮备液10ml,置25ml量瓶中.加水至刻度,摇匀,即得S0₄^2-对照品溶液;标准曲线的制备:精密量取上述对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0m1,分别置25ml比色管中,编号为1至6号,加水至5.0ml,再加入丙酮2ml,用水稀释至20ml,再加入2ml30mg/ml的BaCl₂稀盐酸溶液,用水稀释至刻度,摇匀,静置5分钟,以1号为空白;照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VA紫外-可见分光光度法进行试验,在460nm波长处测定吸光度;以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线;测定法:精密量取藏药组合物棘豆消痒液体制剂1.0-3.0ml或精密称取藏药组合物棘豆消痒固体制剂1-3g,置坩埚内,加入2ml质量体积份数比3-5%Na₂CO₃溶液,搅拌均匀,在电炉上烘干炭化1小时后,移入马弗炉内逐步升温,在500-550°C下灰化3小时,取出,冷却后加入10ml体积份数比2-3%盐酸溶液,微火加热10-20min,过滤,取续滤液5ml,置50ml量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,得供试品溶液;精密量取供试品溶液5.0ml,置25ml比色管中,照标准曲线的制备项下的方法,自“加水至5.0ml”起,依法测定吸光度,从标准曲线上读出供试品溶液中硫的含量(μg/ml),计算,即得;D.总黄酮的含量测定对照品溶液的制备:精密称取芦丁对照品10mg,置50ml量瓶中,加乙醇适量,置水浴上微热使溶解,放冷,加乙醇至刻度,摇匀,即得;标准曲线的制备:精密量取上述对照品液0.0ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml,分别置25ml量瓶中,编号为1至6号;各加水至5.0ml,加重量体积份数比4-5%亚硝酸钠试液1ml,混匀,放置6分钟,加重量体积份数比10-15%硝酸铝溶液1ml,摇匀,放置6分钟,加氢氧化钠试液10ml,再加水至刻度,摇匀,放置15分钟,以1号为空白;照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VA紫外-可见分光光度法进行试验,在500nm波长处测定吸收度,以吸收度为纵坐标,对照品浓度为横坐标,绘制标准曲线;测定法:精密量取藏药组合物棘豆消痒液体制剂1.0-3.0ml或精密称取藏药组合物棘豆消痒固体制剂1-3g,置具塞的锥形瓶中,精密加入乙醇50ml,密塞,称定重量,超声处理30分钟,放冷,再称定重量,用乙醇补足减失的重量,摇匀,用活性炭脱色5分钟,滤过;精密量取续滤液3.0ml,置25ml量瓶中,照标准曲线制备项下的方法,自“加水至5.0ml”起,依法测定吸收度,从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的含量(μg/ml),计算,即得;E.熊去氧胆酸的含量测定照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VID高效液相色谱法进行测定;色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以体积份数比75-80:20-25甲醇-体积份数比1%冰醋酸水溶液为流动相;蒸发光散射检测器检测;理论板数按熊去氧胆酸峰计算应不低于2000;对照品溶液的制备:取熊去氧胆酸对照品适量,精密称定,加乙醇制成每lml含0.3mg的溶液,即得;供试品溶液的制备:精密量取藏药组合物棘豆消痒液体制剂0.5-1.5ml或精密称取藏药组合物棘豆消痒固体制剂0.5-1.5g,精密量取藏药组合物棘豆消痒制剂1.0ml,置具塞的锥形瓶中,精密加入乙醇50ml,密塞,称定重量,超声处理30分钟,放冷,再称定重量,用乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液25ml,浓缩至干,残渣加体积份数比1%冰醋酸水溶液10ml使溶解,用乙酸乙酯萃取5次,每次10ml,合并乙酸乙酯液,40°C以下减压蒸干,残渣加乙醇溶解并定容至2ml量瓶中,摇匀,滤过,取续滤液,即得;测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得;F.麝香酮的含量测定照《中华人名共和国药典》2010年版一部附录VIE气相色谱法进行测定;色谱条件与系统适用性试验:以体积份数比50%甲基-50%苯基聚硅氧烷DM-17为固定相,涂布浓度为2%;柱温180°C;理论板数按麝香酮峰计算应不低于1500;对照品溶液的制备:取麝香酮对照品适量,加乙酸乙酯制成每1ml含6μg的溶液,即得;供试品溶液的制备:精密量取藏药组合物棘豆消痒液体制剂1.0-3.0ml或精密称取藏药组合物棘豆消痒固体制剂1-3g,置具塞的锥形瓶中,精密加入乙醇50ml,密塞,称定重量,超声处理20-30分钟,放冷,再称定重量,用乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液25ml,浓缩至干,残渣加乙酸乙酯溶解并定容至1ml量瓶中,摇匀,滤过,取续滤液,即得;测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μl,注入气相色谱仪,测定,即得。优选的,一种原料药组成为轮叶棘豆150重量份、熊胆粉2重量份、麝香1重量份、儿茶50重量份、岩精膏50重量份、胆矾30重量份、硫磺(制)30重量份、蓖麻子50重量份、川西千里光10重量份、安息香10重量份的藏药组合物棘豆消痒洗剂的质量检测方法,该方法包括如下鉴别和/或含量测定方法中的一种或几种:鉴别:A.轮叶棘豆的鉴别取本发明藏药组合物棘豆消痒洗剂,相当于原药材7.5g,滤过,滤液用二氯甲烷振摇提取2次,每次加二氯甲烷20ml,合并二氯甲烷液,挥干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液;取轮叶棘豆对照药材2g,加水20ml,煎煮1h,滤过,滤液用二氯甲烷振摇提取2次,每次加二氯甲烷20ml,合并二氯甲烷液,挥干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为对照药材溶液;照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VIB薄层色谱法进行试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积份数比为7:5的环己烷-乙酸乙酯为展开剂,展开,取出,晾干;喷以体积份数比10%硫酸乙醇溶液,105°C加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;B.儿茶的鉴别取本发明藏药组合物棘豆消痒洗剂,相当于原药材7.5g,滤过,滤液用二氯甲烷振摇提取2次,每次加二氯甲烷20ml,合并二氯甲烷液,挥干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液;取儿茶对照药材1g,加水20ml,煎煮1h,滤过,滤液用二氯甲烷振摇提取2次,每次加二氯甲烷20ml,合并二氯甲烷液,挥干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为对照药材溶液;照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VIB薄层色谱法进行试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积份数比为4:5:0.4的环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂,展开,取出,晾干;喷以体积份数比10%硫酸乙醇溶液,105°C加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;C.安息香的鉴别取本发明藏药组合物棘豆消痒洗剂,相当于原药材7.5g,水浴蒸干,残渣加甲醇20ml,超声20分钟,滤过,滤液水浴蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;取安息香对照药材0.2g,加甲醇10ml,超声20分钟,滤过,滤液水浴蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为对照药材溶液;照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VIB薄层色谱法进行试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积份数比为6:4:3:0.5的沸程为60-90°C的石油醚-正己烷-乙酸乙酯-冰醋酸为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯365nm下检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的荧光斑点;含量测定:A.重金属的含量限度测定对照品溶液的制备:精密称取30mg硝酸铅,置250ml量瓶中,加体积份数比10%稀硝酸2ml溶解后,加蒸馏水至刻度,摇匀,作为标准对照品溶液;标准曲线的制备:精密量取上述对照品溶液0.0、0.1、0.5、1.0、5.0、10.0ml,分别置100ml量瓶中,编号为1至6号,加去离子水至10.0ml,备用;取空坩埚6只,在550°C灰化3小时,放冷,加体积份数比36~38%浓盐酸2ml,置水浴上蒸干后加水15ml,水浴加热2分钟,冷却后加酚酞指示剂1滴,用氨试液调至微红色,加稀醋酸2ml,分别转移至已备好的1至6号100ml量瓶中,加10μl硫化钠溶液,再加pH3.2的水溶液稀释至刻度,摇匀,静置5分钟,以1号为空白;照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VA紫外-可见分光光度法进行试验,在208nm波长处依次测定吸光度;以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线;测定法:精密量取藏药组合物棘豆消痒洗剂2.0ml,置坩埚内,缓缓炽灼至完全炭化,放冷,加体积份数比96~98%浓硫酸1.0ml,使恰湿润,用40-60°C低温加热至硫酸除尽后,再加体积份数比65~68%浓硝酸1.0ml蒸干,至氧化氮蒸气除尽后,放冷,照标准曲线的制备项下的方法,自“在550°C灰化3小时”起,依法测定吸光度,从标准曲线上读出供试品溶液中重金属的含量(μg/ml),计算,即得;本发明藏药组合物棘豆消痒洗剂中重金属的含量以硝酸铅(Pb(NO₃)₂)计,不得高于80μg/ml。B.蓖麻碱的含量测定照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VID高效液相色谱法进行测定;色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以体积份数比13:87乙腈-水为流动相;检测波长为308nm;理论板数按蓖麻碱峰计算应不低于2000;对照品溶液的制备:取蓖麻碱对照品适量,精密称定,加乙醇制成每lml含20μg的溶液,即得;供试品溶液的制备:精密量取藏药组合物棘豆消痒洗剂2.0ml,置具塞的锥形瓶中,精密加入乙醇50ml,密塞,称定重量,超声处理30分钟,放冷,再称定重量,用乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液25ml,浓缩至干,残渣加水10ml加热使溶解,用氯仿萃取5次,每次10ml,合并氯仿液,蒸干,残渣加乙醇溶解并定容至2ml容量瓶中,摇匀,滤过,取续滤液,即得;测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得;本发明藏药组合物棘豆消痒洗剂中蓖麻碱(C₈H₈O₂N₂)的含量不得高于100μg/ml。C.硫的含量测定对照品溶液的制备:精密称取0.15g无水Na₂S0₄,用水溶解后,转入100ml量瓶中,用水定容,得S0₄^2-的贮备液;临用时,精密量取贮备液10ml,置25ml量瓶中.加水至刻度,摇匀,即得S0₄^2-对照品溶液;标准曲线的制备:精密量取上述对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0m1,分别置25ml比色管中,编号为1至6号,加水至5.0ml,再加入丙酮2ml,用水稀释至20ml,再加入2ml30mg/ml的BaCl₂稀盐酸溶液,用水稀释至刻度,摇匀,静置5分钟,以1号为空白;照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VA紫外-可见分光光度法进行试验,在460nm波长处测定吸光度;以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线;测定法:精密量取藏药组合物棘豆消痒洗剂2.0ml,置坩埚内,加入2ml质量体积份数比5%Na₂CO₃溶液,搅拌均匀,在电炉上烘干炭化1小时后,移入马弗炉内逐步升温,在550°C下灰化3小时,取出,冷却后加入10ml体积份数比2-3%盐酸溶液,微火加热10min,过滤,取续滤液5ml,置50ml量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,得供试品溶液;精密量取供试品溶液5.0ml,置25ml比色管中,照标准曲线的制备项下的方法,自“加水至5.0ml”起,依法测定吸光度,从标准曲线上读出供试品溶液中硫的含量(μg/ml),计算,即得;本发明藏药组合物棘豆消痒洗剂中硫(S)的含量不得低于10mg/ml。D.总黄酮的含量测定对照品溶液的制备:精密称取芦丁对照品10mg,置50ml量瓶中,加乙醇适量,置水浴上微热使溶解,放冷,加乙醇至刻度,摇匀,即得;标准曲线的制备:精密量取上述对照品液0.0ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml,分别置25ml量瓶中,编号为1至6号;各加水至5.0ml,加重量体积份数比5%亚硝酸钠试液1ml,混匀,放置6分钟,加重量体积份数比10%硝酸铝溶液1ml,摇匀,放置6分钟,加氢氧化钠试液10ml,再加水至刻度,摇匀,放置15分钟,以1号为空白;照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VA紫外-可见分光光度法进行试验,在500nm波长处测定吸收度,以吸收度为纵坐标,对照品浓度为横坐标,绘制标准曲线;测定法:精密量取藏药组合物棘豆消痒洗剂2.0ml,置具塞的锥形瓶中,精密加入乙醇50ml,密塞,称定重量,超声处理30分钟,放冷,再称定重量,用乙醇补足减失的重量,摇匀,用活性炭脱色5分钟,滤过;精密量取续滤液3.0ml,置25ml量瓶中,照标准曲线制备项下的方法,自“加水至5.0ml”起,依法测定吸收度,从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的含量(μg/ml),计算,即得;本发明藏药组合物棘豆消痒洗剂中总黄酮的含量以芦丁(C₂₇H₃₀O₁₆)计,不得低于1.5mg/ml。E.熊去氧胆酸的含量测定照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VID高效液相色谱法进行测定;色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以体积份数比80:20甲醇-体积份数比1%冰醋酸水溶液为流动相;蒸发光散射检测器检测;理论板数按熊去氧胆酸峰计算应不低于2000;对照品溶液的制备:取熊去氧胆酸对照品适量,精密称定,加乙醇制成每lml含0.3mg的溶液,即得;供试品溶液的制备:精密量取藏药组合物棘豆消痒洗剂1.0ml,置具塞的锥形瓶中,精密加入乙醇50ml,密塞,称定重量,超声处理30分钟,放冷,再称定重量,用乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液25ml,浓缩至干,残渣加体积份数比1%冰醋酸水溶液10ml使溶解,用乙酸乙酯萃取5次,每次10ml,合并乙酸乙酯液,40°C以下减压蒸干,残渣加乙醇溶解并定容至2ml量瓶中,摇匀,滤过,取续滤液,即得;测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得;本发明藏药组合物棘豆消痒洗剂中熊去氧胆酸(C₁₄H₄₀O₄)的含量不得低于1.0mg/ml。F.麝香酮的含量测定照《中华人名共和国药典》2010年版一部附录VIE气相色谱法进行测定;色谱条件与系统适用性试验:以体积份数比50%甲基-50%苯基聚硅氧烷DM-17为固定相,涂布浓度为2%;柱温180°C;理论板数按麝香酮峰计算应不低于1500;对照品溶液的制备:取麝香酮对照品适量,加乙酸乙酯制成每1ml含6μg的溶液,即得;供试品溶液的制备:精密量取藏药组合物棘豆消痒洗剂2.0ml,置具塞的锥形瓶中,精密加入乙醇50ml,密塞,称定重量,超声处理30分钟,放冷,再称定重量,用乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液25ml,浓缩至干,残渣加乙酸乙酯溶解并定容至1ml量瓶中,摇匀,滤过,取续滤液,即得;测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μl,注入气相色谱仪,测定,即得;本发明藏药组合物棘豆消痒洗剂中麝香酮(C₃₆H₃₀O)的含量不得低于3.5μg/ml。本说明书中所述的重量份与体积份的单位对应关系为g/ml或kg/l。本发明的有益效果:1.轮叶棘豆的鉴别中,原标准的样品制备方法中使用的乙醚为易制毒试剂,本发明用二氯甲烷予以替换,保证了试剂使用的安全性;将在紫外光灯365nm下检视改进为用体积份数比10%硫酸乙醇溶液显色,检视更直观,且效果优于原标准;2.儿茶的鉴别中,同样把样品处理方法中的乙醚用二氯甲烷替代,保证了试剂的安全性;原展开方法的斑点的Rf值偏高,且不易调整,更换新的展开剂后,斑点的Rf值适中,易于检视;3.增加了安息香的鉴别,进一步提高了制剂的质量标准;总之,新的薄层鉴别方法,更换了易制毒试剂,优化了检视方法,增加了新的鉴别,提高了制剂的质量标准,加快了鉴别速度和鉴别质量。4.藏药组合物棘豆消痒洗剂原质量标准未对方中含有的贵重药材(熊胆粉、麝香)、蓖麻子中毒性成分蓖麻碱、矿物药材[岩精膏、胆矾、硫磺(制)]等进行质量控制,使得棘豆消痒洗剂质量检测不够准确可靠,质量标准有待提高。本发明对现有的藏药组合物棘豆消痒洗剂质量标准进行了相应提高,采用紫外-可见分光光度法对该制剂中的重金属进行了含量检查,采用高效液相色谱法对该制剂中的蓖麻碱进行了含量检查,采用紫外-可见分光光度法分别对该制剂中的硫、总黄酮进行了含量测定,采用高效液相色谱-蒸发光散射法对该制剂中的熊去氧胆酸进行了含量测定,采用高效气相色谱法对该制剂中的麝香酮进行了含量测定。5.本发明在藏药组合物棘豆消痒洗剂原标准的基础上增加了该制剂中重金属、蓖麻碱的检查方法,增加了该制剂中硫、总黄酮、熊去氧胆酸、麝香酮的含量测定方法,确保了该制剂的安全有效、质量可控。下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。实验例1:棘豆消痒洗剂原标准薄层鉴别实验棘豆消痒洗剂由青海金诃藏药药业股份有限公司提供,鉴别方法参照国家药品标准WS-11342(ZD-1342)-2002-2012Z。A.轮叶棘豆的鉴别取棘豆消痒洗剂20ml,相当于原药材7.5g,加乙醚振摇提取2次,每次15ml,合并乙醚液,蒸干,残渣加甲醇3ml使溶解,作为供试品溶液。另取轮叶棘豆对照药材2g,加水10ml,煮沸,滤过,滤液作为对照药材溶液。照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VIB薄层色谱法进行试验,吸取上述两种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积分数3:2:1的正丁醇-醋酸-水为展开剂,展开,取出,晾干,喷以体积份数比10%的硫酸乙醇溶液,在105°C加热数分钟,置紫外光灯365nm下检视,试验结果见附图1;从左到右依次是轮叶棘豆对照药材,棘豆消痒洗剂供试品。B.儿茶的鉴别取棘豆消痒洗剂20ml,相当于原药材7.5g,加乙醚振摇提取2次,每次15ml,合并乙醚液,蒸干,残渣加甲醇3ml使溶解,作为供试品溶液。另取儿茶对照药材0.5g,加水20ml,加热使溶解,放冷,同法制成对照药材溶液。照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VIB薄层色谱法进行试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积分数3:2:1的正丁醇-醋酸-水为展开剂,展开,取出,晾干,喷以体积份数比10%的硫酸乙醇溶液,在105°C加热至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,但斑点的Rf值过高;试验结果见附图2,从左到右依次是儿茶对照药材,棘豆消痒洗剂供试品。实施例2:改进后棘豆消痒洗剂薄层鉴别方法棘豆消痒洗剂由青海金诃藏药药业股份有限公司提供。A.轮叶棘豆的鉴别取棘豆消痒洗剂20ml,相当于原药材7.5g,滤过,滤液用二氯甲烷振摇提取2次,每次加二氯甲烷20ml,合并二氯甲烷液,挥干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液;取轮叶棘豆对照药材2g,加水20ml,煎煮1h,滤过,滤液用二氯甲烷振摇提取2次,每次加二氯甲烷20ml,合并二氯甲烷液,挥干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为对照药材溶液;照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VIB薄层色谱法进行试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积份数比为7:5的环己烷-乙酸乙酯为展开剂,展开,取出,晾干;喷以体积份数比10%硫酸乙醇溶液,105°C加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,见附图3。结果分析:在体积份数比为5-9:5的环己烷-乙酸乙酯为展开剂的条件下有较好的展开效果。其中,体积份数比7:5的环己烷-乙酸乙酯为展开剂展开效果最好。B.儿茶的鉴别取棘豆消痒洗剂20ml,相当于原药材7.5g,滤过,滤液用二氯甲烷振摇提取2次,每次加二氯甲烷20ml,合并二氯甲烷液,挥干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液;取儿茶对照药材1g,加水20ml,煎煮1h,滤过,滤液用二氯甲烷振摇提取2次,每次加二氯甲烷20ml,合并二氯甲烷液,挥干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为对照药材溶液;照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VIB薄层色谱法进行试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积份数比为4:5:0.4的环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂,展开,取出,晾干;喷以体积份数比10%硫酸乙醇溶液,105°C加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,见附图4;结果分析:在体积份数比为4:2-7:0.4的环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂的条件下有较好的展开效果。其中,体积份数比4:5:0.4的环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂展开效果最好。C.安息香的鉴别取棘豆消痒洗剂20ml,相当于原药材7.5g,水浴蒸干,残渣加甲醇20ml,超声20分钟,滤过,滤液水浴蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;取安息香对照药材0.2g,加甲醇10ml,超声20分钟,滤过,滤液水浴蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为对照药材溶液;照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VIB薄层色谱法进行试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积份数比为4-8:4:3:0.5的沸程为60-90°C的石油醚-正己烷-乙酸乙酯-冰醋酸为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯365nm下检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的荧光斑点,见附图5;结果分析:在体积份数比为4-8:4:3:0.5的沸程为60-90°C的石油醚-正己烷-乙酸乙酯-冰醋酸为展开剂的条件下有较好的展开效果。其中,体积份数比6:4:3:0.5的沸程为60-90°C的石油醚-正己烷-乙酸乙酯-冰醋酸为展开剂展开效果最好。实验例3:重金属的含量检查实验1.仪器、试药和供试样品仪器:岛津UV-2450型紫外-可见分光光度计(日本岛津公司);岛津AuW220D型电子天平(日本岛津公司);pB-10型数显酸度计(德国赛多利斯sartorius公司);2.5-10型箱式电阻炉(北京市永光明医疗器械厂)。主要试剂:pH3.2的水溶液(用稀盐酸和氨试液调制);硫化钠溶液(取5g硫化钠,加水10ml,再加甘油30ml,溶解后保存在棕色容量瓶中)。对照品:硝酸铅对照品(天津市永大化学试剂开发中心,含量不少于99.0%),批号:20051010。样品:棘豆消痒洗剂,10ml/支(青海金诃藏药药业股份有限公司),批号:20110810、20110811、20110812。2.对照品溶液的制备精密称取27.52mg硝酸铅,置250ml量瓶中,加体积份数比10%稀硝酸2ml溶解后,加蒸馏水至刻度,摇匀,作为标准对照品溶液(相当于100μg/ml)。3.检测波长的选择取标准对照品溶液0.0、1.0ml,分别置100ml量瓶中,加10μl硫化钠溶液,再加pH3.2的水溶液稀释至刻度,摇匀,静置5分钟,用紫外-可见分光光度计在0~400nm作全波长扫描,确定最大吸收波长。根据紫外吸收图谱可知,对照品溶液在208nm波长处有最大吸收,故确定208nm为检测波长。4.标准曲线的制备和线性关系的考察精密量取硝酸铅对照品溶液(110.08μg/ml)0.0、0.1、0.5、1.0、5.0、10.0ml,分别置100ml量瓶中,编号为1至6号,加去离子水至10.0ml,备用;取空坩埚6只,在550°C灰化3小时,放冷,加体积份数比36~38%浓盐酸2ml,置水浴上蒸干后加水15ml,水浴加热2分钟,冷却后加酚酞指示剂1滴,用氨试液调至微红色,加稀醋酸2ml,分别转移至已备好的1至6号100ml量瓶中,加10μl硫化钠溶液,再加pH3.2的水溶液稀释至刻度,摇匀,静置5分钟,以1号为空白;照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VA紫外-可见分光光度法,在208nm波长处依次测定吸光度;以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线,得回归方程A=0.0720C+0.0088,相关系数R=0.9991。结果表明,硝酸铅在0.11008μg/ml~11.008μg/ml范围内,吸光度(A)与对照品浓度(C)线性关系良好。结果见表1,图6。表1重金属检查线性关系考察结果 ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/> 5.样品中重金属的含量检查精密量取棘豆消痒洗剂2.0ml,置坩埚内,缓缓炽灼至完全炭化,放冷,加体积份数比98%浓硫酸1.0ml,使恰湿润,用低温加热至硫酸除尽后,再加体积份数比68%浓硝酸1.0ml蒸干,至氧化氮蒸气除尽后,放冷,照标准曲线的制备项下的方法,自“在550°C灰化3小时”起,依法测定吸光度,从标准曲线上读出供试品溶液中重金属的含量(μg/ml),计算,即得。6.精密度试验精密量取硝酸铅对照品溶液1.0ml置100ml量瓶中,照标准曲线的制备项下的方法,自“加去离子水至10.0ml”起,依法测定吸光度,连续测定6次。结果表明,仪器精密度良好。结果见表2。表2重金属检查精密度试验结果 ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/> 7.重复性试验精密量取同一批藏药组合物棘豆消痒洗剂(生产批号:20110810)2.0ml,置坩埚内,共6份,按样品中重金属的含量检查项下的方法制备样品溶液,依法测定吸光度,计算样品中重金属的含量。结果表明,该分析方法重复性良好。结果见表3。表3重金属检查重复性试验结果 ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/> 8.回收率试验精密称取同一批已知重金属含量的藏药组合物棘豆消痒洗剂(生产批号:20110810)1.0ml,共6份,各精密加入硝酸铅对照品,按样品中重金属的含量检查项下的方法制备样品溶液,依法测定吸光度,计算样品中重金属的含量,计算回收率。结果表明,该测定方法测定结果准确。结果见表4。表4重金属检查回收率试验结果 ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/> 9.重金属检查取藏药组合物棘豆消痒洗剂三批,测定并计算重金属含量。结果见表5。表5重金属检查结果 ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/> 实验例4:蓖麻碱的含量检查实验1.仪器、试药和供试样品仪器:日立L-2100高效液相色谱仪;岛津AuW220D电子天平。对照品:蓖麻碱对照品:自制,经质谱、核磁共振¹³C谱与核磁共振¹H谱结构确定,纯度99.1%。样品:棘豆消痒洗剂,10ml/支(青海金诃藏药药业股份有限公司),批号:20110810、20110811、20110812。2.流动相选择分别研究了甲醇-水体系、乙腈-水体系流动相条件下,蓖麻碱色谱峰的分离效果,结果发现以乙腈-水体系为流动相,蓖麻碱色谱峰的峰形较好,乙腈-水在体积份数比为13:87时,蓖麻碱能达到较好的色谱分离效果。3.对照品溶液的制备取蓖麻碱对照品适量,精密称定,加乙醇制成每1ml含20μg的溶液,即得。4.供试品溶液的制备按含量测定项下方法对供试品溶液进行检测。按供试品溶液的制备项下的方法,分别考察了不同提取方法、不同提取溶剂、不同提取时间条件下,蓖麻碱的提取效果。以每克药品中蓖麻碱的含量为指标确定提取方法、提取溶剂、提取时间。结果见表6、表7和表8。表6提取方法考察试验结果 ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/> 表7提取溶剂考察试验结果 ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/> 表8提取时间考察试验结果 ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/> 结果表明:超声提取和回流提取所测得蓖麻碱的含量基本一致,考虑到超声提取操作简便,故选择提取方法为超声提取;甲醇提取和乙醇提取所测得蓖麻碱的含量基本一致,考虑到甲醇毒性较大,故选择提取溶剂为乙醇;提取30分钟和40分钟测得蓖麻碱的含量基本一致,故选择提取时间为30分钟。优选具体方法如下:精密量取棘豆消痒洗剂2.0ml,置具塞的锥形瓶中,精密加入乙醇50ml,密塞,称定重量,超声处理30分钟,放冷,再称定重量,用乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液25ml,浓缩至干,残渣加水10ml加热使溶解,用氯仿萃取5次,每次10ml,合并氯仿液,蒸干,残渣加乙醇溶解并定容至2ml容量瓶中,摇匀,滤过,取续滤液,即得。5.系统适用性试验按含量测定项下方法,分别精密吸取蓖麻碱对照品溶液、供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,记录色谱图。结果表明,对照品、供试品色谱中蓖麻碱与其相邻色谱峰的分离度均大于1.5。6.标准曲线的制备和线性关系的考察精密量取蓖麻碱对照品贮备液溶液(42.32μg/ml)1ml、3ml、5ml、8ml、10ml,分别置10ml容量瓶中,乙醇稀释至刻度,摇匀,各精密进样10μl,以峰面积A为纵坐标,对照品浓度C为横坐标,进行线性回归,得蓖麻碱回归方程:A=14669C+109.56,相关系数:R=0.9998。结果表明,腺苷在4.232μg/ml~42.32μg/ml范围内,峰面积A与对照品浓度C线性关系良好。结果见表9、图7。表9蓖麻碱检查线性关系考察结果 ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/> 7.精密度试验分别精密吸取蓖麻碱对照品溶液10μl,注入液相色谱仪,各连续测定6次,记录峰面积并计算相对标准偏差。结果表明,该仪器精密度良好。结果见表10。表10蓖麻碱检查精密度试验结果 ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/> 8.重复性试验精密量取同一批藏药组合物棘豆消痒洗剂(生产批号:20110810)2.0ml,共6份,按供试品溶液的制备项下的方法制备供试品溶液,分别精密吸取10μl,注入液相色谱仪,计算样品中蓖麻碱的含量。结果表明,该分析方法重复性良好。结果见表11。表11蓖麻碱检查重复性试验结果 ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/> 9.回收率试验精密量取同一批藏药组合物棘豆消痒洗剂(生产批号:20110810)1.0ml,共6份,各精密加入蓖麻碱对照品,测定其含量,计算回收率。结果表明,该测定方法测定结果准确。结果见表12。表12蓖麻碱检查回收率试验结果 ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/> 10.蓖麻碱检查取藏药组合物棘豆消痒洗剂三批,测定并计算蓖麻碱含量。结果见表13。表13蓖麻碱检查结果 ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/> 实验例5:硫的含量测定实验1.仪器、试药和供试样品仪器:岛津UV-2450型紫外-可见分光光度计(日本岛津公司);岛津AuW220D型电子天平(日本岛津公司);2.5-10型箱式电阻炉(北京市永光明医疗器械厂)。样品:棘豆消痒洗剂,10ml/支(青海金诃藏药药业股份有限公司),批号:20110810、20110811、20110812。2.对照品溶液的制备精密称取0.13916g无水Na₂S0₄,用水溶解后,转入100ml量瓶中,用水定容,得SO₄^2-的贮备液;临用时,精密量取贮备液10ml,置25ml量瓶中.加水至刻度,摇匀,即得SO₄^2-对照品溶液(SO₄^2-含量为0.55664mg/ml)。3.检测波长的选择取标准对照品溶液0.0、3.0ml,分别置25ml比色管中,加水至5.0ml,再加入丙酮2ml,用水稀释至20ml左右,再加入2ml30mg/ml的BaCl₂稀盐酸溶液,用水稀释至刻度,摇匀,静置5分钟,用紫外-可见分光光度计在400~600nm作全波长扫描,确定最大吸收波长。根据紫外吸收图谱可知,对照品溶液在460nm波长处有最大吸收,故确定460nm为检测波长。4.标准曲线的制备和线性关系的考察精密量取SO₄^2-对照品溶液(556.64μg/ml)0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml,分别置25ml比色管中,编号为1至6号,加水至5.0ml,再加入丙酮2ml,用水稀释至20ml左右,再加入2ml30mg/ml的BaCl₂稀盐酸溶液,用水稀释至刻度,摇匀,静置5分钟,以1号为空白;照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VA紫外-可见分光光度法进行测定,在460nm波长处测定吸光度;以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线,得回归方程A=0.0063C+0.005,相关系数R=0.9993。结果表明,SO₄^2-在22.2656μg/ml~111.328μg/ml范围内,吸光度(A)与对照品浓度(C)线性关系良好。结果见表14,图8。表14硫测定线性关系考察结果 ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/> 5.样品中硫的含量测定精密量取棘豆消痒洗剂2.0ml,置坩埚内,加入2ml质量体积份数比5%Na₂CO₃溶液,搅拌均匀,在电炉上烘干炭化1小时后,移入马弗炉内逐步升温,在550°C下灰化3小时,取出,冷却后加入10ml体积份数比2%盐酸溶液,微火加热10min,过滤,取续滤液5ml,置50ml量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,得供试品溶液;精密量取供试品溶液5.0ml,置25ml比色管中,照标准曲线的制备项下的方法,自“加水至5.0ml”起,依法测定吸光度,从标准曲线上读出供试品溶液中硫的含量(μg/ml),计算,即得。6.精密度试验精密量取S042-对照品溶液3.0ml置25ml比色管中,照标准曲线的制备项下的方法,自“加水至5.0ml”起,依法测定吸光度,连续测定6次。结果表明,仪器精密度良好。结果见表15。表15硫测定精密度试验结果 ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/> 7.重复性试验精密量取同一批藏药组合物棘豆消痒洗剂(生产批号:20110810)2.0ml,置坩埚内,共6份,按样品中硫的含量测定项下的方法制备样品溶液,依法测定吸光度,计算样品中硫的含量。结果表明,该分析方法重复性良好。结果见表16。表16硫测定重复性试验结果 ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/> ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/> 8.回收率试验精密称取同一批已知硫含量的藏药组合物棘豆消痒洗剂(生产批号:20110810)1.0ml,共6份,各精密加入S0₄^2-对照品对照品,按样品中硫的含量测定项下的方法制备样品溶液,依法测定吸光度,计算样品中硫的含量,计算回收率。结果表明,该测定方法测定结果准确。结果见表17。表17硫测定回收率试验结果 ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/> 9.硫测定取藏药组合物棘豆消痒洗剂三批,测定并计算硫含量。结果见表18。表18硫测定结果 ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/> 实验例6:总黄酮的含量测定实验1.仪器、试药和供试样品仪器:岛津UV-2450型紫外-可见分光光度计(日本岛津公司);岛津AuW220D型电子天平(日本岛津公司)。对照品:芦丁对照品(中国药品生物制品检定所),批号:100080-200306。样品:棘豆消痒洗剂,10ml/支(青海金诃藏药药业股份有限公司),批号:20110810、20110811、20110812。2.对照品溶液的制备精密称取芦丁对照品10.12mg,置50ml量瓶中,加乙醇适量,置水浴上微热使溶解,放冷,加乙醇至刻度,摇匀,即得(每1ml含芦丁202.4μg)。3.检测波长的选择取标准对照品溶液0.0、3.0ml,分别置25ml量瓶中,各加水至5.0ml,加重量体积份数比5%亚硝酸钠试液1ml,混匀,放置6分钟,加重量体积份数比10%硝酸铝溶液1ml,摇匀,放置6分钟,加氢氧化钠试液10ml,再加水至刻度,摇匀,放置15分钟,用紫外-可见分光光度计在400~600nm作全波长扫描,确定最大吸收波长。根据紫外吸收图谱可知,对照品溶液在500nm波长处有最大吸收,故确定500nm为检测波长。4.标准曲线的制备和线性关系的考察精密量取芦丁对照品液(202.4μg/ml)0.0ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml,分别置25ml量瓶中,编号为1至6号;各加水至5.0ml,加重量体积份数比5%亚硝酸钠试液1ml,混匀,放置6分钟,加重量体积份数比10%硝酸铝溶液1ml,摇匀,放置6分钟,加氢氧化钠试液10ml,再加水至刻度,摇匀,放置15分钟,以1号为空白;照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VA紫外-可见分光光度法进行测定,在500nm波长处测定吸收度,以吸收度为纵坐标,对照品浓度为横坐标,绘制标准曲线,得回归方程A=0.0095C+0.0004,相关系数R=0.9997。结果表明,芦丁-在8.096μg/ml~40.48μg/ml范围内,吸光度(A)与对照品浓度(C)线性关系良好。结果见表19,图9。表19总黄酮测定线性关系考察结果 ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/> 5.样品中总黄酮的含量测定精密量取棘豆消痒洗剂2.0ml,置具塞的锥形瓶中,精密加入乙醇50ml,密塞,称定重量,超声处理30分钟,放冷,再称定重量,用乙醇补足减失的重量,摇匀,用活性炭脱色5分钟,滤过;精密量取续滤液3.0ml,置25ml量瓶中,照标准曲线制备项下的方法,自“加水至5.0ml”起,依法测定吸收度,从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的含量(μg/ml),计算,即得。6.精密度试验精密量取芦丁对照品溶液3.0ml置25ml量瓶中,照标准曲线的制备项下的方法,自“加水至5.0ml”起,依法测定吸光度,连续测定6次。结果表明,仪器精密度良好。结果见表20。表20总黄酮测定精密度试验结果 ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/> ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/> 7.重复性试验精密量取同一批藏药组合物棘豆消痒洗剂(生产批号:20110810)2.0ml,置具塞的锥形瓶中,共6份,按样品中总黄酮的含量测定项下的方法制备样品溶液,依法测定吸光度,计算样品中总黄酮的含量。结果表明,该分析方法重复性良好。结果见表21。表21总黄酮测定重复性试验结果 ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/> 8.回收率试验精密称取同一批已知总黄酮含量的藏药组合物棘豆消痒洗剂(生产批号:20110810)1.0ml,共6份,各精密加入芦丁对照品对照品,按样品中总黄酮的含量测定项下的方法制备样品溶液,依法测定吸光度,计算样品中总黄酮的含量,计算回收率。结果表明,该测定方法测定结果准确。结果见表22。表22总黄酮测定回收率试验结果 ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/> 9.总黄酮测定取藏药组合物棘豆消痒洗剂三批,测定并计算总黄酮含量。结果见表23。表23总黄酮测定结果 ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/> 实验例7:熊去氧胆酸的含量测定实验1.仪器、试药和供试样品仪器:日立L-2100高效液相色谱仪;Alltech2000ES蒸发光散射检测器;岛津AuW220D电子天平。对照品:熊去氧胆酸对照品(中国药品生物制品检定所)批号:110816-200305。样品:棘豆消痒洗剂,10ml/支(青海金诃藏药药业股份有限公司),批号:20110810、20110811、20110812。2.流动相选择分别研究了甲醇-体积份数比1%冰醋酸体系、乙腈-体积份数比1%冰醋酸体系流动相条件下,熊去氧胆酸色谱峰的分离效果,结果发现以甲醇-体积份数比1%冰醋酸体系为流动相,熊去氧胆酸色谱峰的峰形较好,甲醇-体积份数比1%冰醋酸水溶液在体积份数比为80:20时,熊去氧胆酸能达到较好的色谱分离效果。3.对照品溶液的制备取熊去氧胆酸对照品适量,精密称定,加乙醇制成每1ml含0.3mg的溶液,即得。4.供试品溶液的制备按含量测定项下方法对供试品溶液进行检测。按供试品溶液的制备项下的方法,分别考察了不同提取方法、不同提取溶剂、不同提取时间条件下,熊去氧胆酸的提取效果。以每克药品中熊去氧胆酸的含量为指标确定提取方法、提取溶剂、提取时间。结果见表24、表25和表26。表24提取方法考察试验结果 ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/> 表25提取溶剂考察试验结果 ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/> 表26提取时间考察试验结果 ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/> 结果表明:超声共振提取所测得熊去氧胆酸明显高于振揺提取,故选择提取方法为超声提取;甲醇提取和乙醇提取所测得熊去氧胆酸的含量基本一致,考虑到甲醇毒性较大,故选择提取溶剂为乙醇;提取30分钟和40分钟测得熊去氧胆酸的含量基本一致,故选择提取时间为30分钟。优选具体方法如下:精密量取棘豆消痒洗剂1.0ml,置具塞的锥形瓶中,精密加入乙醇50ml,密塞,称定重量,超声处理30分钟,放冷,再称定重量,用乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液25ml,浓缩至干,残渣加体积份数比1%冰醋酸水溶液10ml使溶解,用乙酸乙酯萃取5次,每次10ml,合并乙酸乙酯液,40°C以下减压蒸干,残渣加乙醇溶解并定容至2ml量瓶中,摇匀,滤过,取续滤液,即得。5.系统适用性试验按含量测定项下方法,分别精密吸取熊去氧胆酸对照品溶液、供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,记录色谱图。结果表明,对照品、供试品色谱中熊去氧胆酸与其相邻色谱峰的分离度均大于1.5。6.标准曲线的制备和线性关系的考察精密量取熊去氧胆酸对照品贮备液溶液(612.6μg/ml)1ml、3ml、5ml、8ml、10ml,分别置10ml容量瓶中,乙醇稀释至刻度,摇匀,各精密进样10μl,以峰面积的对数(LogA)对对照品浓度的对数(LogC)进行线性回归,得熊去氧胆酸回归方程:LogA=1.0192LogC+3.6448,相关系数:R=0.9998。结果表明,熊去氧胆酸在61.26μg/ml-612.6μg/ml范围内,熊去氧胆酸峰面积的对数(LogA)与对照品浓度的对数(LogC)线性关系良好。结果见表27、图10。表27熊去氧胆酸测定线性关系考察结果 ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/> 7.精密度试验分别精密吸取熊去氧胆酸对照品溶液10μl,注入液相色谱仪,各连续测定6次,记录峰面积并计算相对标准偏差。结果表明,该仪器精密度良好。结果见表28。表28熊去氧胆酸测定精密度试验结果 ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/> 8.稳定性试验供试品溶液制备完成后,精密吸取10μl,注入液相色谱仪,记录峰面积,以后每隔2小时测定一次,考察8小时,记录峰面积并计算相对标准偏差。结果表明,供试品溶液中熊去氧胆酸在8小时内测定结果稳定。结果见表29。表29熊去氧胆酸测定稳定性试验结果 ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/> ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/> 9.重复性试验精密量取同一批藏药组合物棘豆消痒洗剂(生产批号:20110810)1.0ml,共6份,按供试品溶液的制备项下的方法制备供试品溶液,分别精密吸取10μl,注入液相色谱仪,计算样品中熊去氧胆酸的含量。结果表明,该分析方法重复性良好。结果见表30。表30熊去氧胆酸测定重复性试验结果 ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/> 10.回收率试验精密量取同一批藏药组合物棘豆消痒洗剂(生产批号:20110810)0.5ml,共6份,各精密加入熊去氧胆酸对照品,测定其含量,计算回收率。结果表明,该测定方法测定结果准确。结果见表31。表31熊去氧胆酸测定回收率试验结果 ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/> 11.熊去氧胆酸测定取藏药组合物棘豆消痒洗剂三批,测定并计算熊去氧胆酸含量。结果见表32。表32熊去氧胆酸测定结果 ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/> ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/> 实验例8:麝香酮的含量测定实验1.仪器、试药和供试样品仪器:GC-2014C型岛津气相色谱仪:岛津AuW220D电子天平。对照品:麝香酮对照品(中国药品生物制品鉴定所),批号:0819-200006。样品:棘豆消痒洗剂,10ml/支(青海金诃藏药药业股份有限公司),批号:20110810、20110811、20110812。2.色谱条件以体积份数比50%甲基-50%苯基聚硅氧烷DM-17为固定相,涂布浓度为2%;柱温180°C,柱温180°C,进样口温度200°C,检测器温度220°C,氢火焰离子化检测器(FID)。在上述条件下,供试品溶液中麝香酮色谱峰能达到基线分离,峰形对称。3.对照品溶液的制备取麝香酮对照品适量,加乙酸乙酯制成每1ml含5μg的溶液,即得。4.供试品溶液的制备按含量测定项下方法对供试品溶液进行检测。按供试品溶液的制备项下的方法,分别考察了不同提取方法、不同提取溶剂、不同提取时间条件下,麝香酮的提取效果。以每克药品中麝香酮的含量为指标确定提取方法、提取溶剂、提取时间。结果见表33、表34和表35。表33提取方法考察试验结果 ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/> 表34提取溶剂考察试验结果 ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/> 表35提取时间考察试验结果 ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/> 结果表明:超声和振提取所测得麝香酮的含量明显高于振揺提取,故选择提取方法为超声提取;甲醇提取和乙醇提取所测得麝香酮的含量基本一致,考虑到甲醇毒性较大,故选择提取溶剂为乙醇;提取30分钟和40分钟测得麝香酮的含量基本一致,故选择提取时间为30分钟。优选具体方法如下:精密量取棘豆消痒洗剂2.0ml,置具塞的锥形瓶中,精密加入乙醇50ml,密塞,称定重量,超声处理30分钟,放冷,再称定重量,用乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液25ml,浓缩至干,残渣加乙酸乙酯溶解并定容至1ml量瓶中,摇匀,滤过,取续滤液,即得。5.系统适用性试验按含量测定项下方法,分别精密吸取麝香酮对照品溶液、供试品溶液各1μl,注入气相色谱仪,记录色谱图。结果表明,对照品、供试品色谱中麝香酮与其相邻色谱峰的分离度均大于1.5。6.标准曲线的制备和线性关系的考察精密量取麝香酮对照品贮备液溶液(11.3μg/ml)2ml、4ml、6ml、8ml、10ml,分别置10ml容量瓶中,乙酸乙酯稀释至刻度,摇匀,各精密进样1μl,以峰面积(A)对对照品浓度(C)进行线性回归,得麝香酮回归方程:A=6149.5C+4.6,相关系数:R=0.9998。结果表明,麝香酮在2.26μg/ml~11.3μg/ml范围内,麝香酮的峰面积(A)与浓度(C)线性关系良好。结果见表36、图11。表36麝香酮测定线性关系考察结果 ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/> 7.精密度试验分别精密吸取麝香酮对照品溶液1μl,注入气相色谱仪,各连续测定6次,记录峰面积并计算相对标准偏差。结果表明,该仪器精密度良好。结果见表37。表37麝香酮测定精密度试验结果 ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/> 8.稳定性试验供试品溶液制备完成后,精密吸取1μl,注入气相色谱仪,记录峰面积,以后每隔2小时测定一次,考察8小时,记录峰面积并计算相对标准偏差。结果表明,供试品溶液中麝香酮在8小时内测定结果稳定。结果见表38。表38麝香酮测定稳定性试验结果 ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/> ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/> 8.重复性试验精密量取同一批藏药组合物棘豆消痒洗剂(生产批号:20110810)1.0ml,共6份,按供试品溶液的制备项下的方法制备供试品溶液,分别精密吸取1μl,注入气相色谱仪,计算样品中麝香酮的含量。结果表明,该分析方法重复性良好。结果见表39。表39麝香酮测定重复性试验结果 ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/> 9.回收率试验精密量取同一批藏药组合物棘豆消痒洗剂(生产批号:20110810)1.0ml,共6份,各精密加入麝香酮对照品,测定其含量,计算回收率。结果表明,该测定方法测定结果准确。结果见表40。表40麝香酮测定回收率试验结果 ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/> 10.麝香酮测定取藏药组合物棘豆消痒洗剂三批,测定并计算麝香酮含量。结果见表41。表41麝香酮测定结果 ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/> 附图说明:图1是棘豆消痒洗剂原标准方法轮叶棘豆薄层鉴别色谱图;图中a是轮叶棘豆对照药材,b是棘豆消痒洗剂供试品;图2是棘豆消痒洗剂原标准方法儿茶薄层鉴别色谱图;图中c是儿茶对照药材,d是棘豆消痒洗剂供试品;图3是本发明棘豆消痒洗剂轮叶棘豆薄层鉴别色谱图;图中e是轮叶棘豆对照药材,f是棘豆消痒洗剂供试品,g是轮叶棘豆阴性对照;图4是本发明棘豆消痒洗剂儿茶薄层鉴别色谱图;图中h是儿茶对照药材,i是棘豆消痒洗剂供试品,j是儿茶阴性对照;图5是本发明棘豆消痒洗剂安息香薄层鉴别色谱图;图中k是安息香对照药材,l是棘豆消痒洗剂供试品,m是安息香阴性对照;图6重金属检查线性关系图;图7蓖麻碱含量测定线性关系图;图8硫含量测定线性关系图;图9总黄酮含量测定线性关系图;图10熊去氧胆酸线性关系图;图11麝香酮含量测定线性关系图。下述实施例均能实现上述实验例所述的效果。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作详细的阐述,但不限于这些具体记载的实施例。所检测的藏药组合物棘豆消痒洗剂为青海金诃藏药药业股份有限公司产售。所检测的藏药组合物棘豆消痒软膏为用棘豆消痒洗剂原料药配方配制的软膏剂。实施例1:棘豆消痒洗剂的质量检测方法鉴别:A.轮叶棘豆的鉴别取本发明藏药组合物棘豆消痒洗剂,相当于原药材7.5g,滤过,滤液用二氯甲烷振摇提取2次,每次加二氯甲烷20ml,合并二氯甲烷液,挥干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液;取轮叶棘豆对照药材2g,加水20ml,煎煮1h,滤过,滤液用二氯甲烷振摇提取2次,每次加二氯甲烷20ml,合并二氯甲烷液,挥干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为对照药材溶液;照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VIB薄层色谱法进行试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积份数比为7:5的环己烷-乙酸乙酯为展开剂,展开,取出,晾干;喷以体积份数比10%硫酸乙醇溶液,105°C加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;B.儿茶的鉴别取本发明藏药组合物棘豆消痒洗剂,相当于原药材7.5g,滤过,滤液用二氯甲烷振摇提取2次,每次加二氯甲烷20ml,合并二氯甲烷液,挥干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液;取儿茶对照药材1g,加水20ml,煎煮1h,滤过,滤液用二氯甲烷振摇提取2次,每次加二氯甲烷20ml,合并二氯甲烷液,挥干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为对照药材溶液;照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VIB薄层色谱法进行试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积份数比为4:5:0.4的环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂,展开,取出,晾干;喷以体积份数比10%硫酸乙醇溶液,105°C加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;C.安息香的鉴别取本发明藏药组合物棘豆消痒洗剂,相当于原药材7.5g,水浴蒸干,残渣加甲醇20ml,超声20分钟,滤过,滤液水浴蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;取安息香对照药材0.2g,加甲醇10ml,超声20分钟,滤过,滤液水浴蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为对照药材溶液;照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VIB薄层色谱法进行试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积份数比为6:4:3:0.5的沸程为60-90°C的石油醚-正己烷-乙酸乙酯-冰醋酸为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯365nm下检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的荧光斑点;含量测定:A.重金属的含量限度测定对照品溶液的制备:精密称取30mg硝酸铅,置250ml量瓶中,加体积份数比10%稀硝酸2ml溶解后,加蒸馏水至刻度,摇匀,作为标准对照品溶液;标准曲线的制备:精密量取上述对照品溶液0.0、0.1、0.5、1.0、5.0、10.0ml,分别置100ml量瓶中,编号为1至6号,加去离子水至10.0ml,备用;取空坩埚6只,在550°C灰化3小时,放冷,加体积份数比36~38%浓盐酸2ml,置水浴上蒸干后加水15ml,水浴加热2分钟,冷却后加酚酞指示剂1滴,用氨试液调至微红色,加稀醋酸2ml,分别转移至已备好的1至6号100ml量瓶中,加10μl硫化钠溶液,再加pH3.2的水溶液稀释至刻度,摇匀,静置5分钟,以1号为空白;照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VA紫外-可见分光光度法进行试验,在208nm波长处依次测定吸光度;以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线;测定法:精密量取藏药组合物棘豆消痒洗剂2.0ml,置坩埚内,缓缓炽灼至完全炭化,放冷,加体积份数比96~98%浓硫酸1.0ml,使恰湿润,用50°C低温加热至硫酸除尽后,再加体积份数比65~68%浓硝酸1.0ml蒸干,至氧化氮蒸气除尽后,放冷,照标准曲线的制备项下的方法,自“在550°C灰化3小时”起,依法测定吸光度,从标准曲线上读出供试品溶液中重金属的含量(μg/ml),计算,即得;本发明藏药组合物棘豆消痒洗剂中重金属的含量以硝酸铅(Pb(NO₃)₂)计,不得高于80μg/ml。B.蓖麻碱的含量测定照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VID高效液相色谱法进行测定;色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以体积份数比13:87乙腈-水为流动相;检测波长为308nm;理论板数按蓖麻碱峰计算应不低于2000;对照品溶液的制备:取蓖麻碱对照品适量,精密称定,加乙醇制成每lml含20μg的溶液,即得;供试品溶液的制备:精密量取藏药组合物棘豆消痒洗剂2.0ml,置具塞的锥形瓶中,精密加入乙醇50ml,密塞,称定重量,超声处理30分钟,放冷,再称定重量,用乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液25ml,浓缩至干,残渣加水10ml加热使溶解,用氯仿萃取5次,每次10ml,合并氯仿液,蒸干,残渣加乙醇溶解并定容至2ml容量瓶中,摇匀,滤过,取续滤液,即得;测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得;本发明藏药组合物棘豆消痒洗剂中蓖麻碱(C₈H₈O₂N₂)的含量不得高于100μg/ml。C.硫的含量测定对照品溶液的制备:精密称取0.15g无水Na₂S0₄,用水溶解后,转入100ml量瓶中,用水定容,得S0₄^2-的贮备液;临用时,精密量取贮备液10ml,置25ml量瓶中.加水至刻度,摇匀,即得S0₄^2-对照品溶液;标准曲线的制备:精密量取上述对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0m1,分别置25ml比色管中,编号为1至6号,加水至5.0ml,再加入丙酮2ml,用水稀释至20ml,再加入2ml30mg/ml的BaCl₂稀盐酸溶液,用水稀释至刻度,摇匀,静置5分钟,以1号为空白;照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VA紫外-可见分光光度法进行试验,在460nm波长处测定吸光度;以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线;测定法:精密量取藏药组合物棘豆消痒洗剂2.0ml,置坩埚内,加入2ml质量体积份数比5%Na₂CO₃溶液,搅拌均匀,在电炉上烘干炭化1小时后,移入马弗炉内逐步升温,在550°C下灰化3小时,取出,冷却后加入10ml体积份数比2-3%盐酸溶液,微火加热10min,过滤,取续滤液5ml,置50ml量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,得供试品溶液;精密量取供试品溶液5.0ml,置25ml比色管中,照标准曲线的制备项下的方法,自“加水至5.0ml”起,依法测定吸光度,从标准曲线上读出供试品溶液中硫的含量(μg/ml),计算,即得;本发明藏药组合物棘豆消痒洗剂中硫(S)的含量不得低于10mg/ml。D.总黄酮的含量测定对照品溶液的制备:精密称取芦丁对照品10mg,置50ml量瓶中,加乙醇适量,置水浴上微热使溶解,放冷,加乙醇至刻度,摇匀,即得;标准曲线的制备:精密量取上述对照品液0.0ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml,分别置25ml量瓶中,编号为1至6号;各加水至5.0ml,加重量体积份数比5%亚硝酸钠试液1ml,混匀,放置6分钟,加重量体积份数比10%硝酸铝溶液1ml,摇匀,放置6分钟,加氢氧化钠试液10ml,再加水至刻度,摇匀,放置15分钟,以1号为空白;照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VA紫外-可见分光光度法进行试验,在500nm波长处测定吸收度,以吸收度为纵坐标,对照品浓度为横坐标,绘制标准曲线;测定法:精密量取藏药组合物棘豆消痒洗剂2.0ml,置具塞的锥形瓶中,精密加入乙醇50ml,密塞,称定重量,超声处理30分钟,放冷,再称定重量,用乙醇补足减失的重量,摇匀,用活性炭脱色5分钟,滤过;精密量取续滤液3.0ml,置25ml量瓶中,照标准曲线制备项下的方法,自“加水至5.0ml”起,依法测定吸收度,从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的含量(μg/ml),计算,即得;本发明藏药组合物棘豆消痒洗剂中总黄酮的含量以芦丁(C₂₇H₃₀O₁₆)计,不得低于1.5mg/ml。E.熊去氧胆酸的含量测定照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VID高效液相色谱法进行测定;色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以体积份数比80:20甲醇-体积份数比1%冰醋酸水溶液为流动相;蒸发光散射检测器检测;理论板数按熊去氧胆酸峰计算应不低于2000;对照品溶液的制备:取熊去氧胆酸对照品适量,精密称定,加乙醇制成每lml含0.3mg的溶液,即得;供试品溶液的制备:精密量取藏药组合物棘豆消痒洗剂1.0ml,置具塞的锥形瓶中,精密加入乙醇50ml,密塞,称定重量,超声处理30分钟,放冷,再称定重量,用乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液25ml,浓缩至干,残渣加体积份数比1%冰醋酸水溶液10ml使溶解,用乙酸乙酯萃取5次,每次10ml,合并乙酸乙酯液,40°C以下减压蒸干,残渣加乙醇溶解并定容至2ml量瓶中,摇匀,滤过,取续滤液,即得;测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得;本发明藏药组合物棘豆消痒洗剂中熊去氧胆酸(C₁₄H₄₀O₄)的含量不得低于1.0mg/ml。F.麝香酮的含量测定照《中华人名共和国药典》2010年版一部附录VIE气相色谱法进行测定;色谱条件与系统适用性试验:以体积份数比50%甲基-50%苯基聚硅氧烷DM-17为固定相,涂布浓度为2%;柱温180°C;理论板数按麝香酮峰计算应不低于1500;对照品溶液的制备:取麝香酮对照品适量,加乙酸乙酯制成每1ml含6μg的溶液,即得;供试品溶液的制备:精密量取藏药组合物棘豆消痒洗剂2.0ml,置具塞的锥形瓶中,精密加入乙醇50ml,密塞,称定重量,超声处理30分钟,放冷,再称定重量,用乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液25ml,浓缩至干,残渣加乙酸乙酯溶解并定容至1ml量瓶中,摇匀,滤过,取续滤液,即得;测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μl,注入气相色谱仪,测定,即得;本发明藏药组合物棘豆消痒洗剂中麝香酮(C₃₆H₃₀O)的含量不得低于3.5μg/ml。实施例2:棘豆消痒软膏剂的质量检测方法鉴别:A.轮叶棘豆的鉴别取本发明藏药组合物棘豆消痒软膏,相当于原药材7.5g,加水30ml,超声30分钟,滤过,滤液用二氯甲烷振摇提取2次,每次加二氯甲烷20ml,合并二氯甲烷液,挥干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液;取轮叶棘豆对照药材2g,加水20ml,煎煮1h,滤过,滤液用二氯甲烷振摇提取2次,每次加二氯甲烷20ml,合并二氯甲烷液,挥干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为对照药材溶液;照《中国药典》2010年版一部附录VIB薄层色谱法进行试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积份数比为7:5的环己烷-乙酸乙酯为展开剂,展开,取出,晾干;喷以体积份数比10%硫酸乙醇溶液,105°C加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;B.儿茶的鉴别取本发明藏药组合物棘豆消痒软膏,相当于原药材7.5g,加水30ml,超声30分钟,滤过,滤液用二氯甲烷振摇提取2次,每次加二氯甲烷20ml,合并二氯甲烷液,挥干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液;取儿茶对照药材1g,加水20ml,煎煮1h,滤过,滤液用二氯甲烷振摇提取2次,每次加二氯甲烷20ml,合并二氯甲烷液,挥干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为对照药材溶液;照《中国药典》2010年版一部附录VIB薄层色谱法进行试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积份数比为4:5:0.4的环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂,展开,取出,晾干;喷以体积份数比10%硫酸乙醇溶液,105°C加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;C.安息香的鉴别取本发明藏药组合物棘豆消痒软膏,相当于原药材7.5g,水浴蒸干,残渣加甲醇20ml,超声20分钟,滤过,滤液水浴蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;取安息香对照药材0.2g,加甲醇10ml,超声20分钟,滤过,滤液水浴蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为对照药材溶液;照《中国药典》2010年版一部附录VIB薄层色谱法进行试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积份数比为6:4:3:0.5的沸程为60-90°C的石油醚-正己烷-乙酸乙酯-冰醋酸为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯365nm下检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的荧光斑点;含量测定:A.重金属的含量测定对照品溶液的制备:精密称取30mg硝酸铅,置250ml量瓶中,加体积份数比10%稀硝酸2ml溶解后,加蒸馏水至刻度,摇匀,作为标准对照品溶液;标准曲线的制备:精密量取上述对照品溶液0.0、0.1、0.5、1.0、5.0、10.0ml,分别置100ml量瓶中,编号为1至6号,加去离子水至10.0ml,备用;取空坩埚6只,在550°C灰化3小时,放冷,加体积份数比38%浓盐酸2ml,置水浴上蒸干后加水15ml,水浴加热2分钟,冷却后加酚酞指示剂1滴,用氨试液调至微红色,加稀醋酸2ml,分别转移至已备好的1至6号100ml量瓶中,加10μl硫化钠溶液,再加pH3.2的水溶液稀释至刻度,摇匀,静置5分钟,以1号为空白;照《中国药典》2010年版一部附录VA紫外-可见分光光度法进行试验,在208nm波长处依次测定吸光度;以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线;测定法:精密量取藏药组合物棘豆消痒软膏2.0g,置坩埚内,缓缓炽灼至完全炭化,放冷,加体积份数比98%浓硫酸1.0ml,使恰湿润,用40-60°C低温加热至硫酸除尽后,再加体积份数比68%浓硝酸1.0ml蒸干,至氧化氮蒸气除尽后,放冷,照标准曲线的制备项下的方法,自“在550°C灰化3小时”起,依法测定吸光度,从标准曲线上读出供试品溶液中重金属的含量(μg/ml),计算,即得;本发明藏药组合物棘豆消痒软膏中重金属的含量以硝酸铅(Pb(NO₃)₂)计,不得高于80μg/g。B.蓖麻碱的含量测定照《中国药典》2010年版一部附录VID高效液相色谱法进行测定;色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以体积份数比13:87乙腈-水为流动相;检测波长为308nm;理论板数按蓖麻碱峰计算应不低于2000;对照品溶液的制备:取蓖麻碱对照品适量,精密称定,加乙醇制成每lml含20μg的溶液,即得;供试品溶液的制备:精密量取藏药组合物棘豆消痒软膏2.0g,置具塞的锥形瓶中,精密加入乙醇50ml,密塞,称定重量,超声处理30分钟,放冷,再称定重量,用乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液25ml,浓缩至干,残渣加水10ml加热使溶解,用氯仿萃取5次,每次10ml,合并氯仿液,蒸干,残渣加乙醇溶解并定容至2ml容量瓶中,摇匀,滤过,取续滤液,即得;测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得;本发明藏药组合物棘豆消痒软膏中蓖麻碱(C₈H₈O₂N₂)的含量不得高于100μg/g。C.硫的含量测定对照品溶液的制备:精密称取0.15g无水Na₂S0₄,用水溶解后,转入100ml量瓶中,用水定容,得S0₄^2-的贮备液;临用时,精密量取贮备液10ml,置25ml量瓶中.加水至刻度,摇匀,即得S0₄^2-对照品溶液l;标准曲线的制备:精密量取上述对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0m1,分别置25ml比色管中,编号为1至6号,加水至5.0ml,再加入丙酮2ml,用水稀释至20ml,再加入2ml30mg/ml的BaCl₂稀盐酸溶液,用水稀释至刻度,摇匀,静置5分钟,以1号为空白;照《中国药典》2010年版一部附录VA紫外-可见分光光度法进行试验,在460nm波长处测定吸光度;以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线;测定法:精密量取藏药组合物棘豆消痒软膏2.0g,置坩埚内,加入2ml质量体积份数比5%Na₂CO₃溶液,搅拌均匀,在电炉上烘干炭化1小时后,移入马弗炉内逐步升温,在550°C下灰化3小时,取出,冷却后加入10ml体积份数比2%盐酸溶液,微火加热10min,过滤,取续滤液5ml,置50ml量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,得供试品溶液;精密量取供试品溶液5.0ml,置25ml比色管中,照标准曲线的制备项下的方法,自“加水至5.0ml”起,依法测定吸光度,从标准曲线上读出供试品溶液中硫的含量(μg/ml),计算,即得;本发明藏药组合物棘豆消痒软膏中硫(S)的含量不得低于10mg/g。D.总黄酮的含量测定对照品溶液的制备:精密称取芦丁对照品10mg,置50ml量瓶中,加乙醇适量,置水浴上微热使溶解,放冷,加乙醇至刻度,摇匀,即得;标准曲线的制备:精密量取上述对照品液0.0ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml,分别置25ml量瓶中,编号为1至6号;各加水至5.0ml,加重量体积份数比5%亚硝酸钠试液1ml,混匀,放置6分钟,加重量体积份数比10%硝酸铝溶液1ml,摇匀,放置6分钟,加氢氧化钠试液10ml,再加水至刻度,摇匀,放置15分钟,以1号为空白;照《中国药典》2010年版一部附录VA紫外-可见分光光度法进行试验,在500nm波长处测定吸收度,以吸收度为纵坐标,对照品浓度为横坐标,绘制标准曲线;测定法:精密量取藏药组合物棘豆消痒软膏2.0g,置具塞的锥形瓶中,精密加入乙醇50ml,密塞,称定重量,超声处理30分钟,放冷,再称定重量,用乙醇补足减失的重量,摇匀,用活性炭脱色5分钟,滤过;精密量取续滤液3.0ml,置25ml量瓶中,照标准曲线制备项下的方法,自“加水至5.0ml”起,依法测定吸收度,从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的含量(μg/ml),计算,即得;本发明藏药组合物棘豆消痒软膏中总黄酮的含量以芦丁(C₂₇H₃₀O₁₆)计,不得低于1.5mg/g。E.熊去氧胆酸的含量测定照《中国药典》2010年版一部附录VID高效液相色谱法进行测定;色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以体积份数比80:20甲醇-体积份数比1%冰醋酸水溶液为流动相;蒸发光散射检测器检测;理论板数按熊去氧胆酸峰计算应不低于2000;对照品溶液的制备:取熊去氧胆酸对照品适量,精密称定,加乙醇制成每lml含0.3mg的溶液,即得;供试品溶液的制备:精密量取藏药组合物棘豆消痒软膏1.0g,置具塞的锥形瓶中,精密加入乙醇50ml,密塞,称定重量,超声处理30分钟,放冷,再称定重量,用乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液25ml,浓缩至干,残渣加体积份数比1%冰醋酸水溶液10ml使溶解,用乙酸乙酯萃取5次,每次10ml,合并乙酸乙酯液,40°C以下减压蒸干,残渣加乙醇溶解并定容至2ml量瓶中,摇匀,滤过,取续滤液,即得;测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得;本发明藏药组合物棘豆消痒软膏中熊去氧胆酸(C₁₄H₄₀O₄)的含量不得低于1.0mg/g。F.麝香酮的含量测定照《中国药典》2010年版一部附录VIE气相色谱法进行测定;色谱条件与系统适用性试验:以体积份数比50%甲基-50%苯基聚硅氧烷DM-17为固定相,涂布浓度为2%;柱温180°C;理论板数按麝香酮峰计算应不低于1500;对照品溶液的制备:取麝香酮对照品适量,加乙酸乙酯制成每1ml含6μg的溶液,即得;供试品溶液的制备:精密量取藏药组合物棘豆消痒软膏2.0g,置具塞的锥形瓶中,精密加入乙醇50ml,密塞,称定重量,超声处理30分钟,放冷,再称定重量,用乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液25ml,浓缩至干,残渣加乙酸乙酯溶解并定容至1ml量瓶中,摇匀,滤过,取续滤液,即得;测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μl,注入气相色谱仪,测定,即得;本发明藏药组合物棘豆消痒软膏中麝香酮(C₃₆H₃₀O)的含量不得低于3.5μg/g。